四君子颗粒对脾虚动物胃肠细胞保护作用的机理研究

成都中医药大学学报　２００１年３月第２４卷第ｌ期　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆｃＩ－ｅｒ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ１删　Ｍａｒ．２００１，Ｖｏ１．２４．Ｎｏ．Ｉ　≯。一≯｜∥　≯ｊ　零ｉ肇哆零　四君子颗粒对脾虚动物胃肠细胞　保护作用的机理研究　彭成　曹小玉　周智科　田述缓　杨智梅　（１成都中医药大学，四ＪＩｌ成都６１００７５；２．华西医科大学）　摘要：探讨四君子颗粒对脾虚动物胃肠细胞保护作用的机理。结果表明，四君子颗粒能升高食醋致　脾虚大鼠的胃肠中性粘液，促进肠上皮细胞更新，提高胃晒细胞线粒体琥珀酸脱氢酶和胃腑细胞膜Ｎａ　一Ｋ　一　ＡＴＰ酶活性，增强ＳＯＤ活性；四君子颗粒能扩张食醋致脾虚小鼠的肠系膜微动脉管径，增加毛细血管开放　数。四君子颗粒促进肠上皮细胞更新的作用较正大养胃冲荆强。　关键词：　四君子颗粒；脾气虚证；胃肠细胞保护　中图分类号：Ｒ２８５．５；Ｒ２２８；Ｒ２５５．５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００４－０６６８（２００１）０１－００３２４３３　四君子颗粒具有胃肠细胞保护、抗脾虚动物胃　７）、脾虚模型组（ｎ＝９）、自然恢复组（　＝８）、　肠细胞损伤的作用…１。我们运用酶组织化学、微循　四君子颗粒小剂量组（ｎ＝８）、四君子颗粒中剂量　环测定、放射免疫分析等技术，进行了四君子颗粒　组（ｎ＝８）、四君子颗粒大剂量组（　＝８）、正大　抗食醋大鼠、小鼠脾虚动物模型胃肠细胞损伤作用　养胃冲剂组（ｎ＝８）。食醋法造模　１０　ｄ后，按组　的机制研究。现将结果报告如下。　灌胃生理盐水３．４　ｍＬ／ｋｇ，四君子颗粒药液１．７　ｌ实验材料　ｍＬ／　、３．４　ｍＬ／ｋｇ、６．８￣Ｌ／ｋｇ，养胃冲剂药液　１．１药品　１３．６ｍＬ／　，连续给药５　ｄ。第１６　ｄ处死动物，取　①四君子颗粒，由成都中医药大学药学院提　胃、空肠组织各一块，立即投人１０％甲醛液内固　供，批号：９８０７１２，每ｇ颗粒含原生药３．４ｇ。用　定，石腊包埋，切片，ＰＡＳ染色　Ｊ，光镜下观察。　蒸馏水配制成１００％的药液（每ｍＬ含原生药ｌｇ）　结果：脾虚模型组胃、空肠粘液糖蛋白减少；经四　备用。　君子颗粒及养胃冲荆治疗后，胃肠粘液糖蛋白增　②阳性对照品：正大养胃冲剂，由正大青春宝　加：自然恢复组胃粘液糖蛋白仍少，空肠粘液糖蛋　药业有限公司生产，生产批文：浙卫药准字　白有所增加。结果见表１。　（１９９３）０３７６—１号，批号：９７０９３９，用蒸馏水配制　表１四君子颗粒对脾虚丈鼠胃肠粘液的影响　成０．５　ｇ／ｍＬ药液备用。　１．２动物　ｓＤ大鼠，体重１７０　ｇ±２１０　ｇ，雌雄均有；ＮＩＨ　小鼠，体重１８　ｇ±２２　ｇ，雌雄各半。以上动物均由　成都中医药大学实验动物研究中心提供。动物合格　证号：川实动物管质（９７）第８号，川实动管质　（９７）第６号。动物检疫后备用。　２方法与结果　２．１四君子颗粒对脾虚大鼠胃肠粘液的影响　取ＳＤ大鼠５６只，随机分成空白对照组（　＝　望硅虐燕型塑些塑　ＡＰ＜０．仿；与自捕恢复蛆比较：Ａｐ（０．仿　基金项目：科技部国家新药研究基空：９６—９０１—０５—１９２；四Ⅲ省重点科技项目：９８—１４０；四川省学术技术带共人培养　基空：４９８９９２０　作者简介：彭成，男，１９６４年４月生；医学博士，研究员；研究方向：疾痛动物模型与中药复方药理。　维普资讯 http://www.cqvip.com

第１期　彭成等四君子颗粒对脾虚动物胃肠细胞保护作用的机理研究　。３３　２．２四君子颗粒对脾虚大鼠肠上皮细胞有丝　指数的影响　取ＳＤ大鼠５３只，随机分成空白对照组（　＝　７）、脾虚模型组（ｎ＝７）、自然恢复组（ｎ＝８）、　四君子颗粒小剂量组（Ｔｔ＝８）、四君子颗粒中剂量　组（ｎ＝８）、四君子颗粒大剂量组（　＝８）、养胃　冲剂组（ｎ＝７）。造模、给药方法同２．１。第ｌ６　ｄ，采用Ｈｏｌｔ法＿４Ｊ，腹腔注射硫酸长春新碱１　ｍｇ／　ｋｇ，１　ｈ后处死动物，取空肠一块，甲醛液内固定，　石膜包埋，切片，ＨＥ染色，光镜下计数每只动物　３Ｏ个空肠隐窝腺管内上皮细胞总数及核相细　胞数，算出后者所占的百分比，即有丝指数　（ＪｌｆＩ）。结果：脾虚模型组ＭＩ降低，与空白对照组　比较有极显著性差异；经四君子颗粒治疗后，ＭＩ　升高，与自然恢复组及正大养胃冲剂组比较，有极　显著性差异。结果见表２。　表２四君子颗粒对脾虚大鼠肠　上皮细胞Ⅶ的影响（；±　与空白对照组比较：＊＊Ｐ＜０．０１；与自然恢复组比较：△Ｐ＜　０．０５，△△Ｐ＜０　Ｏ　；与正大养胃冲剂组比较：００尸＜Ｏ．０Ｉ　２．３四君子颗粒对脾虚大鼠胃肠细胞线粒体ｓＤＨ、　细胞膜Ｎａ＋．Ｋ　．ＡＴＰ酶活性的影响　取ｓＤ大鼠５５只，随机分为空白对照组（ｎ＝　８）、脾虚模型组（ｎ＝８）、自然恢复组（ｎ＝８）、四君子　颗粒小剂量（ｎ＝８）、四君子颗粒中剂量组（ｎ＝８）、　四君子颗粒大剂量组（ｎ＝８）、养胃冲剂组（ｎ＝７）。　造模、给药方法同２．１。第１６　ｄ，处死动物，立即取　胃、空肠新鲜组织各一块，合包，置液氮（一１９０℃）中　聚冷，德国ＭＩＣＫＯＷ一５００型恒冷箱切片机切片（一　１８℃），作细胞线粒体琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）、细胞膜　Ｎａ　．Ｋ　．ＡＴＰ酶染色＿３Ｊ，光镜观察。结果：脾虚模型　组胃细胞线粒体ＳＤＨ、胃肠细胞膜Ｎａ　．Ｋ　．ＡＴＰ酶　活性明显降低，与空白对照组比较，有显著性差异；　经四君子颗粒治疗后，胃细胞线粒体ＳＤＨ、胃空肠细　胞膜Ｎａ　．Ｋ　．ＡＴＰ酶活性明显增加。结果见表３，　表４。　寰３　四暑子囊粒对脾直土鼠■，空肠量田舶蛙鞋体印Ｈ｛舌性的影响　目ｓＤＨ　空晡ｓＤＨ　Ｈ卅　空白对照　等窖菪｛ＮＳ　４　脾虚模型　等窖积ＮＳ　０　自然恢复　等窖舞ＮＳ　０　小剂量　２‘　中剂量　２Ａ　太剂量　２Ａ　养胃冲齐鼍　皇窒自　堕塑堕墼：＊Ｐ＜０．∞：与脾虚模型蛆比较：▲Ｐ＜０　０５　寰４四君子囊粒对脾直土鼠■、空厮蛔臆曛ＮＢ　－Ｋ　￣ＡＴＰ酶｛舌性的影响　童皂盟坚塑出墼：＊Ｐ＜０．∞；与自然恢复组比较｝Ａｐ＜０．∞　２．４四君子颗粒对脾虚小鼠肠系膜微循环的影响　取ＮＩＨ小鼠６６只，随机分为空白对照组（ｎ＝　ｌ０）、脾虚模型组（ｎ＝８）、自然恢复组（ｎ＝１０）、四君　子颗粒小剂量（ｎ＝１０）、四君子颗粒中剂量（ｎ＝　ｌＯ）、四君子颗粒大剂量（ｎ＝９）、正大养胃冲剂（　＝　９）。采用食醋法造模，四君子颗粒大中小剂量组分　别灌胃四君子颗粒药液１．７　ｍＩＡｇ、３．４　ｍＩＡｇ、６．８　ｎＲＪｋｓ，正大养胃冲剂组灌胃养胃冲剂１３．６　ｍＬ／ｋｇ。　第１６　ｄ，采用肠系膜微循环观察法　Ｊ，腹腔注射１％　戊巴比妥钠５０　ｍｇ／ｋｇ，麻醉后仰卧，中下腹作一长约　１　ｃｍ的切口，从腹腔轻轻拉出回盲部肠襻，置于　３８℃左右台氏液的肠系膜灌流盒中，ＷＸ一６型多部　位微循环显微仪观察。结果：脾虚模型组小鼠肠系　膜微血管　、　管径呈缩小倾向，毛细血管开放数　降低，与空白对照组比较，有极显著性差异。经四君　子颗粒治疗后，肠系膜微动脉管径扩大、毛细血管开　放数增加，与自然恢复组比较，有显著性或极显著性　差异。结果见表５。　寰５四君子曩牧辩对脾直小ｌ肠采嚷ｔ｜葺环的影响ｆ；±　生皇自盟曼堡．　蕉：－Ｐ　０∞，－－Ｐ　０　０ｌ＿　自　雠ｄ　：△，‘　∞－６△Ｐ　０　ｍ　维普资讯 http://www.cqvip.com

・３４・　成都中医药大学学报　２００１年第２４卷　２．５四君子颗粒对脾虚大鼠血清ＬＰＯ、ＳＯＤ的影响　取大鼠４６只，随机分成空白对照组（ｎ＝６）、脾　虚模型组（ｎ：６）、自然恢复组（ｎ＝６）、四君子颗粒　小剂量组（ｎ＝９）、四君子颗粒中剂量组（ｎ＝７）、四　君子颗粒大剂量组（　＝６）、正大养胃冲剂组（　＝　６）。造模给药方法同２．１。第１６　ｄ，股动脉采血，硫　它能建立一种势能贮备，为细胞的主动转运提供条　件。食醋脾虚动物胃肠细胞线粒体ＳＤＨ、胃肠细胞　膜Ｎａ　．Ｋ　．ＡＴＰ的活性明显降低，细胞外№　进人　膜内，由于渗透压的关系，水分子进人细胞膜内，引　起胃肠细胞肿胀，进而破坏细胞结构，可能是脾虚的　分子学基础；四君子颗粒能明显提高胃细胞线粒体　ＳＤＨ、胃空肠吸收细胞膜Ｎａ　．Ｋ　．ＡＴＰ酶的活性。是　代巴比妥酸比色法测Ｉ．ＰＯ的含量，黄瞟呤氧化酶测　定ＳＯＤ的活性。结果：四君子颗粒大小剂量组ＳＯＤ　活性明显增强，与脾虚模型组或自然恢复组比较　保持胃肠细胞完整和提高空肠吸收上皮细胞吸收营　养物质的前提条件，空肠吸收细胞膜Ｎａ　．Ｋ　．ＡＴＰ　有显著性或极显著性差异。结果见表６。　表６四君子颗粒对脾虚太鼠ＬＰＯ、ＳＯＤ的影响【；±ｓ）　皇自盐　基笪缝蕉：Ｚｘｐ（０∞　３讨论　胃肠细胞和细胞连接的完整性是四君子颗粒抗　胃肠细胞损伤的关键所在。胃肠粘液、胃肠细胞更　新、胃肠细胞能量代谢、胃肠血流量、自由基清除等　胃肠细胞保护诸因素是胃肠细胞和细胞连接完整性　的基础和前提条件，也是研究四君子颗粒抗脾虚动　物胃肠细胞损伤机制的若干环节。　胃肠粘膜表面覆盖的粘液层是胃肠细胞抗损伤　的第一道防线，粘液对胃肠细胞的保护能力依赖于　粘膜表面形成稳定的、非水溶性的凝胶层，而凝胶层　的形成则完全信赖于糖蛋白的多聚结构＿７Ｊ。四君子　颗粒具有增加脾虚动物胃肠细胞表面牯液蛋白的作　用，为胃肠细胞保护提供了屏障。　胃肠上皮细胞的迅速更新，是维持胃肠牯膜上　皮细胞完整性和产生粘液及ＨＣＯｆ的前提条件。　四君子颗粒能明显升高食醋脾虚动物肠上皮细胞　ＭＩ，其作用较正大养胃冲剂为优。提示四君子颗粒　能促进上皮细胞更新，为胃肠细胞保护提供条件。　ＳＤＨ存在于细胞内，与线粒体膜牢固结合，是三　拨酸循环的标志酶，而三羧酸循环为糖、脂、蛋白质、　核酸等代谢的枢纽；细胞膜Ｎａ　．Ｋ　．ＡＴＰ酶（钠泵）　不仅为细胞形态和功能正常提供条件，更重要的是　酶的活性可能是四君子颗粒健脾益气、脾主运化谷　精微的分子学基础。　要保持胃肠粘膜细胞的完整性，必须供给足够　的氧和营养物质，而氧和营养物质，而氧和营养物质　的供给必须依靠胃肠血液循环的完整。四君子颗粒　能明显扩张脾虚动物肠系膜微动脉，增加毛细血管　开放数，为胃肠细胞保护提供可靠的物质运送渠道。　活性氧代谢物是引起消化道胃肠、胰、肝等器官　组织损伤的原因Ｌ８ｊ。ＬＰＯ是体内细胞膜性结构中的　脂质遭受氧自由基损伤的氧化产物，反应氧自由基　损伤的程度；ＳＯＤ是抗氧化物质，能清除超氧阴离　子，保护细胞免受损伤。测定血清ＬＰＯ的含量、　ＯＳＤ的活性，间接反应胃肠细胞的损伤程度和清除　自由基的能力。四君子颗粒能明显提高ＳＯＤ的活　性，提示其具有抗脾虚动物细胞损害的能力。　总之，四君子颗粒能增加胃肠粘液，促进胃肠细　胞更新，提高细胞ＳＤＨ、Ｎａ　一Ｋ　一ＡＴＰ酶活性，增　强胃肠循环血量，抗自由基，通过影响胃肠细胞和细　胞生存环境达到抗胃肠细胞损伤的效果。　参考文献　Ｉ曹小玉，杨智梅，彭成．四君子颗粒抗脾虚动物胃肠细胞损伤的实　验研究［】］．成都中医药大学学报，２０ＯＯ．（３）：３２　２彭庸．镣治国．罗光宇．常用补气、健脾益气药药教作用的比较研　究［Ｊ］中药药理与临床，１９９４，１０（４）：２１　３陈啸梅，周文郁，彭位云．等，组织化学手册　Ｍ］北京　人民卫生　出版社．１９８２．７２，１２５，２２４　４　Ｈｏｌｔ　ＰＲ．Ｓｌ讪ｉｎｔ￣ｔｉｎａｌ　ｅｒｙｐｅ砌ｍ　枷∞　ａｒｅ　Ｌｍｎｍｓｅｄｉｎ　ｓｅａｖａｅｅａｔ　Ｉｍ［Ｊ］．】ｏ　１　１－ｌ口，１９８９，４４（１）ｔ９　５田牛．傲循环方法学［Ｍ］北京｝原子能出版社，１９８７　ｌｌ７　６　Ｓｈｔ　ＳＥ　Ｎｅｕｍｔ］ｒｏｄ　ｄ　ｓｅｔｌｔｅ　ｏｆ　ｍｃ　ｒｒ，ｕｃｏ￣ａｌ　ｂｌｏｏｄｆｌｏ￣－　［Ｊ］．Ｊ　Ｐｈ＃ｏｌｏ￣，，１９７７，（２７２）：６２　７卫金歧．粘液在胃粘膜保护机翩中的作用［Ｊ］．国外医学・消化系　疾病分册．１９９２，１３（４）：２０８　８王志均．细胞保护概念的由来及其发晨［Ｊ］基础医学与临床．　１９９４．ｔ４（２）：１　｛收稿日期：２∞　２３）