饲粮中添加碳酸氢钠对蛋鸡肠道内容物pH、消化蛋白酶活性及菌群的影响

及菌群的影响

刘炎;董晓芳;佟建明;高玉鹏;鲍延娥;崔耀明

【摘 要】[目的]研究蛋鸡饲粮中添加不同水平的碳酸氢钠对肠道内容物pH、消化蛋白酶活性和肠道菌群的影响,以探讨饲粮中添加碳酸氢钠对蛋鸡消化机能的影响.[方法]选取21周龄海兰褐壳蛋鸡450只,随机分为5组,每组6个重复,每重复15只鸡;对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂添加0.1％,0.5％,2.5％,5％ NaHCO3的试验饲粮,试验期133 d.试验期末采集各组肌胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠食糜及粪便,测定各段食糜和粪便的pH、肌胃食糜的胃蛋白酶活性、十二指肠食糜的胰蛋白酶和糜蛋白酶活性以及回肠和盲肠食糜中菌群的变性梯度凝胶电泳(DGGE)指纹图谱,并计算回肠、盲肠食糜的多样性指数和相似性指数.[结果]1)饲粮中添加0.1％和0.5％的碳酸氢钠对蛋鸡肠道各段pH无显著影响,而饲粮中添加2.5％和5％的碳酸氢钠可显著提高蛋鸡肌胃、十二指肠和空肠内容物以及粪便的pH(P＜0.05).2)饲粮中添加2.5％和5％的碳酸氢钠可显著降低肌胃中胃蛋白酶、十二指肠中胰蛋白酶和糜蛋白酶活性(P＜0.05).3)饲粮中添加碳酸氢钠可改变蛋鸡回肠和盲肠的微生物多样性指数.[结论]饲粮中添加高剂量的碳酸氢钠(2.5％和5％)显著影响蛋鸡消化道内环境,降低蛋鸡的蛋白消化机能. 【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 【年(卷),期】2014(042)004 【总页数】8页(P33-40)

【关键词】碳酸氢钠;蛋鸡;肠道pH;蛋白酶活性;肠道菌群

【作 者】刘炎;董晓芳;佟建明;高玉鹏;鲍延娥;崔耀明

【作者单位】西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193 【正文语种】中 文 【中图分类】S831.5

碳酸氢钠(NaHCO3)俗称小苏打，是一种强碱弱酸盐，是调节动物机体体液酸碱平衡的缓冲物质之一[1]。在畜禽养殖业中，碳酸氢钠作为一种电解质添加剂和酸碱调节剂添加于饲料中，有提高畜禽生产性能、促进机体免疫力及抗应激能力、增强畜禽对饲料的消化力和增进食欲的作用[2-3]。营养物质在畜禽消化道内通过物理消化、化学消化和微生物消化后被机体吸收利用，而肠道中酶的活性和微生物区系又与肠道内的pH密切相关[4-5]。因此，作为酸碱调节剂，碳酸氢钠添加于饲粮中可影响畜禽肠道pH、消化酶活性和肠道微生物活动。碳酸氢钠的作用在蛋鸡生产中报道较多并且已经有较为广泛的应用。Yoruk等[6]研究表明，在蛋鸡饲粮中添加碳酸氢钠可显著提高蛋鸡产蛋率和蛋质量。Howes[7]报道，在蛋鸡饲粮中添加碳酸氢钠可增加蛋壳强度。Balnave等[8]研究表明，碳酸氢钠可有效减小热应激对蛋鸡生产性能的负面作用。Anthony[9]报道，在饲粮中添加碳酸氢钠可提高肉鸡肌胃pH，有效降低肉鸡肌胃糜烂的发生率。众所周知，饲粮中的营养物质都是通过肠道而作用于动物体的，因此，饲粮对肠道的影响对于蛋鸡的生理健康以及生产性能都有重大意义。但关于碳酸氢钠对蛋鸡肠道环境影响的报道目前较为少见。

为此，本试验用添加0%，0.1%，0.5%，2.5%和5%碳酸氢钠的5种饲粮饲喂蛋鸡，研究碳酸氢钠对产蛋鸡肠道pH、蛋白酶活性和肠道微生物菌群的影响，旨在为碳酸氢钠在蛋鸡生产中的安全应用提供依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料

试验用碳酸氢钠，购于四川省自贡市鸿鹤化工股份有限公司,纯度为99%。 1.2 试验设计

选取21周龄海兰褐壳蛋鸡450只，随机分为5组，每组6个重复，每重复15只，预饲期2周，试验期19周。基础饲粮为参照美国NRC(1994)中规定的蛋鸡营养需要标准配制的玉米-豆粕型饲粮(Ⅰ组)，试验组饲粮分别在基础饲粮中添加0.1%(Ⅱ组)，0.5%(Ⅲ组)，2.5%(Ⅳ组)和5%(Ⅴ组)的碳酸氢钠，并调整饲粮中玉米、豆粕和油的比例，使各组饲粮与基础饲粮除碳酸氢钠外的其他营养水平基本保持一致，饲粮组成及其营养水平见表1。试验期间每只鸡每天饲喂110 g干粉饲粮，自由饮水，每日保证16 h光照。 1.3 样品采集和指标的测定

1.3.1 试验样品的采集 于试验第19周末，每重复收集同一笼3只鸡的粪便，测定其pH。同时每重复随机选2只蛋鸡进行屠宰，无菌操作收集肌胃、十二指肠、空肠、回肠和盲肠的内容物于试管中。其中肌胃内容物分装2管，分别用于测定pH和胃蛋白酶活性；十二指肠内容物分装2管，分别用于测定pH、胰蛋白酶及糜蛋白酶活性；回肠和盲肠的内容物各分装2管，分别用于测定pH和肠道微生物。 1.3.2 pH值测定 用HANNA pH211型pH计测量各段肠道内容物和粪便的pH。 1.3.3 蛋白酶活性的测定 将肌胃内容物用生理盐水稀释5倍，4 ℃条件下2 000 g离心30 min，取上清液，用于测定胃蛋白酶活性。将十二指肠内容物在4 ℃条件下15 000 g离心20 min，取上清液，用于测定胰蛋白酶和糜蛋白酶活性。

胃蛋白酶活性的测定：根据Bergmeyer[10]的Wirnt方法，用N-乙酰基-L-苯丙氨酰基-3,5-二碘-酪氨酸(Sigma856746)作为底物测定。胃蛋白酶活性单位定义为，在37 ℃、pH=2.0条件下每min释放1 μmol L-3,5-二碘-酪氨酸所具有的活性(U)。

胰蛋白酶活性的测定：根据Bergmeyer[10]的Wirnt方法，用

TAME(SigmaT4626)作为底物测定。胰蛋白酶活性单位定义为，在25 ℃、pH=8.1条件下每min释放1 μmol对-苯磺酸-L-精氨酸所具有的活性(U)。 糜蛋白酶活性的测定：根据Bergmeyer[10]的Wirnt方法，用

BTEE(SigmaB6125)作为底物测定。糜蛋白酶活性单位定义为，在25 ℃、pH=7.件下每min释放1 μmol苯甲酰-L-酪氨酸所具有的活性(U)。 表1 各组蛋鸡饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient level of each diet (air-dry basis)注：预混料为每千克饲粮提供磷酸氢钙16 000 mg，锰63.6 mg，锌69 mg，铁 30 mg，铜6.26 mg，碘0.4 mg，硒0.2 mg，维生素A 8 000 IU，维生素D3 3 000 IU，维生素E 15 IU，维生素K 2 mg，维生素B1 2 mg，维生素B2 4 mg，维生素B6 4 mg，维生素B12 0.01 mg，泛酸钙12 mg，烟酸40 mg，叶酸1 mg，生物素0.1 mg，氯化胆碱500 mg，蛋氨酸990 mg。营养水平中的钠含量为实测值，其余指标为计算值。Note:Each kg of premix provides the following:Dicalcium phosphate 16 000 mg，Mn (as manganese sulfate) 63.6 mg，Zn (as zinc sulfate) 69 mg，Fe (as ferrous sulfate) 30 mg，Cu (as copper sulfate) 6.26 mg，I (as potassium iodide) 0.4 mg，Se (as sodium selenite) 0.2 mg，VA 8 000 IU，VD3 3 000 IU，VE 15 IU，VK 2 mg，VB1 2 mg，VB2 4 mg，VB6 4 mg，VB12 0.01 mg， pantothenic acid 12 mg，nicotinic acid 40 mg， folic acid 1 mg，biotin 0.1 mg， choline chloride 500 mg， methionine 990 mg.Na

contents are measured values while the others are calculated values.项目 Item Ⅰ组 Group ⅠⅡ组 Group ⅡⅢ组 Group ⅢⅣ组 Group ⅣⅤ组 Group Ⅴ 玉米/(g·kg-1) Corn595.0593.0584.5544.0493.0豆粕/(g·kg-1) Soybean meal257.0257.5259.0266.0275.0豆油/(g·kg-1) Soybean

oil10.010.513.527.044.0石粉/(g·kg-1) Limestone85.085.085.085.085.0食盐/(g·kg-1) Salt3.03.03.03.03.0预混料/(g·kg-1) Premix50.050.050.050.050.0碳酸氢钠/(g·kg-1) Sodium bicarbonate01.05.025.050.0合计 Total1 000.01 000.01 000.01 000.01 000.0代谢能/(MJ·kg-1) ME11.3911.3811.3911.3811.38粗蛋白/(g·kg-1) CP163.6163.7163.7163.6163.6钙/(g·kg-1)

Ca36.636.736.736.736.7非植酸磷/(g·kg-1) AP3.63.63.63.63.6赖氨酸/(g·kg-1) Lys8.38.38.48.48.6蛋氨酸+胱氨酸/(g·kg-1) Met+Cys6.16.16.16.06.0钠/(g·kg-1) Na1.92.33.56.612.8

1.3.4 肠道微生物变性梯度凝胶电泳(Denatured gradient gel electrophoresis，DGGE)指纹图谱分析 (1)肠道总微生物DNA的提取[11]。 每组随机取4只鸡的回肠和盲肠内容物用于DGGE指纹图谱分析。每只鸡取回肠和盲肠内容物1 g左右，加入2 mL 0.01 mol/L磷酸盐缓冲溶液(PBS)充分混匀，1 600 r/min离心10 min，取上清液，重复3次，收集所有上清液于离心管中，在10 000 r/min下离心5 min，收集沉淀。在沉淀中加入0.5 mL 1×TAE和0.6 mL 50 g/L溶菌酶，37 ℃水浴3 h。在混合溶液中加入170 μL 100 g/L的十二烷基磺酸钠(SDS)和17 μL 20 g/L 蛋白酶K，37 ℃水浴1 h。在混合液中加入0.6 mL 5 mol/L NaCl和0.5 mL 100 g/L的十六烷基三甲基溴化铵氯化钠(CTAB/NaCl)溶液，65 ℃水浴20 min。将混合液用0.7 mL氯仿/异戊醇(V(氯仿)∶V(异戊醇)=24∶1)抽提1次，10 000 r/min离心10 min，吸取上层液体于另一试管中，用0.7 mL苯酚/氯仿/异戊醇(V(苯酚)∶V(氯仿)∶V(异戊醇)=25∶24∶1)抽提1次，10 000 r/min离心

10 min，吸取上层液体于另一试管中，再用氯仿/异戊醇抽提1次。在吸取的上层液体中加入0.6倍体积的异丙醇，静置沉淀1 h，12 000 r/min离心20 min，收集沉淀。用体积分数70%的乙醇洗涤沉淀，12 000 r/min离心5 min，收集沉淀。用40 μL TE溶解DNA，-20 ℃保存备用。用10 g/L的琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段。

(2)微生物总DNA的PCR扩增[12]。利用细菌通用引物对供试鸡细菌16S rDNA的V3区进行PCR扩增。引物为F341-GC：5′-CGCCCGGGGCG-CGCCCCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGCC-TACGGGAGGCAGCAG-3′ 与R534：5′-ATTACCGCGGCTGCTGG-3′，由上海生工合成。PCR反应体系(25 μL)：2×PCR Taq Mix 12.5 μL(包括 0.2 U/μL Taq DNA 聚合酶、400 mmol/L dNTP、20 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L KCl和3 mmol/L Mg2+)，模板DNA 0.5 μL，上、下游引物各1 μL，ddH2O 10 μL，总体积为25 μL。PCR反应条件为：94 ℃预变性5 min；93 ℃ 30 s，65 ℃ 40 s，72 ℃ 60 s，共30个循环；72 ℃ 5 min，4 ℃保存。用20 g/L的琼脂糖电泳检测PCR产物。

(3)DGGE[13]。采用Bio-Rad Dcode进行DGGE凝胶电泳，将16S rDNA V3区的PCR扩增产物于8%的聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分离。凝胶变性梯度为350～550 g/L，变性方向与电泳方向一致，使用1×TAE缓冲溶液，180 V 60 ℃恒温电泳3 h，电泳结束后用银染色，显色定影后，用Alphimager成像系统拍照。 1.4 数据分析

蛋鸡肠道各段内容物和粪便的pH、蛋白酶活性用SAS 8.1软件进行单因子方差分析和Duncan氏法多重比较，试验结果以“平均值±标准差”表示。肠道微生物菌群的DGGE图像用Quantity One软件进行分析，用UPGMA(Unweighted pair group mean average)进行聚类分析，用Dice法计算各碳酸氢钠添加组与对照组

肠道微生物的相似性指数(Similarity indice)，并根据每个条带的灰度值(Pi)，分别计算每组的香农指数H′(Shannon-Weiner index)，公式为H′=-∑Piln Pi[14]。 2 结果与分析

2.1 碳酸氢钠添加水平对蛋鸡肠道内容物和粪便pH的影响

由表2可知，2.5%和5%碳酸氢钠添加水平组的肌胃、十二指肠内容物及粪便的pH显著高于对照组(P<0.05)，0.1%和0.5%碳酸氢钠添加水平组则与对照组无显著差异。5%碳酸氢钠添加水平组的空肠内容物pH显著高于对照组(P<0.05)，其余3组与对照无显著差异。回肠和盲肠内容物pH在5个处理组之间均无显著差异。

表2 饲粮中碳酸氢钠添加水平对蛋鸡肠道内容物和粪便pH的影响Table 2 Effects of dietary NaHCO3 level on pH of gastrointestinal tract contents and manure of laying hens注：同列数据后所标字母相异表示差异显著(P<0.05)，所标字母相同表示差异不显著(P>0.05)。下表同。Note:Different letters in each column mean that the difference is significant(P<0.05),while same letters in each row indicate that the difference is not significant (P>0.05).The same below.碳酸氢钠添加水平/% NaHCO3 level肌胃Gizzard十二指肠Duodenum空肠Jejunum回肠Ileum盲肠Cecum粪便

Manure0(CK)4.22±0.07 c6.08±0.09 b6.17±0.08 bc6.51±0.10 a6.93±0.11 a7.18±0.26 c0.14.25±0.05 c6.11±0.09 ab6.19±0.09 bc6.56±0.11 a 6.90±0.13 a7.51±0.15 c0.54.25±0.06 c6.08±0.05 b6.14±0.11 c6.53±0.10 a6.87±0.12 a7.50±0.45 c2.54.68±0.09 b6.17±0.08 a6.22±0.10 ab6.54±0.11 a6.94±0.14 a8.45±0.34 b54.88±0.10 a6.16±0.08 a6.28±0.09 a6.57±0.14 a6.93±0.11 a9.13±0.31 a

2.2 碳酸氢钠添加水平对蛋鸡肠道内蛋白酶活性的影响

由表3可知，2.5%和5%碳酸氢钠添加水平组的肌胃中胃蛋白酶活性以及十二指肠中胰蛋白酶活性和糜蛋白酶活性均显著低于对照组(P<0.05)，0.1%和0.5%碳酸氢钠添加水平组则与对照组无显著差异。

表3 饲粮中碳酸氢钠添加水平对蛋鸡肠道胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶活性的影响Table 3 Effects of dietary NaHCO3 level on activities of pepsin,trypsin and chymotrypsin in gastrointestinal tract contents of laying hens U/g碳酸氢钠添加水平/% NaHCO3 level胃蛋白酶Pepsin胰蛋白酶Trypsin糜蛋白酶Chymotrypsin0(CK)526.71±88.29 a15.45±1.16 a477.70±73.31 a0.1558.84±90.44 a13.93±1.07 ab523.54±90. a0.5513.52±71.61

a14.97±1.31 a453.83±63.58 a2.5359.76±.51 b13.33±1.46 b338.38±66.63 b5261.70±54.05 c13.06±1.07 b260.69±.99 b

2.3 碳酸氢钠添加水平对蛋鸡肠道微生物区系多样性的影响及其相似性分析 饲粮中不同碳酸氢钠添加水平组蛋鸡回肠、盲肠菌群16S rDNA V3区PCR-DGGE指纹图谱和聚类分析结果见图1。由图1(左)可知，不同组蛋鸡回肠和盲肠微生物区系均存在共有条带和特异条带，且在每组的4只鸡之间也存在大量特异条带。由聚类分析结果(图1右)可以看出，添加2.5%和5%碳酸氢钠组的回肠微生物与其他组聚为不同簇，添加5%碳酸氢钠组的盲肠微生物与其他组聚为不同簇。其他各碳酸氢钠添加水平组之间无明显的分类。

图1 不同碳酸氢钠添加水平组蛋鸡回肠、盲肠微生物16S rDNA V3区的PCR-DGGE指纹图谱(左)和聚类分析(右)1～4.对照组；5～8、9～12、13～16、17～20.分别为饲粮中添加0.1%,0.5%,2.5%和5%碳酸氢钠组Fig.1 PCR-DGGE DNA profiles (Left) and dendrogram (Right) of the V3 region of 16S rDNA of bacteria in ileal and cecal digesta of laying hens fed with diets containing different levels of sodium bicarbonate1-4.Control group;5-8,9-12,13-

16,and 17-20.Groups fed with diets supplemented with 0.1%,0.5%, 2.5% and 5% sodium bicarbonate,respectively

不同碳酸氢钠添加水平组蛋鸡回肠、盲肠菌群的香农指数见图2，不同组之间的相似性指数见图3。

图2 不同碳酸氢钠添加水平组蛋鸡肠道微生物的香农指数Fig.2 Shannon-Weiner index of intestinal microflora of laying hens fed with diets

containing different levels of NaHCO3图3 不同碳酸氢钠添加水平组蛋鸡肠道微生物与对照组的相似性指数比较Fig.3 Comparison of similarity index in intestinal microflora of laying hens fed with diets containing different levels of NaHCO3 and the control

由图2可见，回肠的香农指数曲线波动大于盲肠，说明饲粮中的碳酸氢钠对回肠菌群的影响大于盲肠；0.1%，0.5%，2.5%和5%碳酸氢钠添加组回肠的香农指数均明显大于对照组。图3显示，各组与对照组的盲肠、回肠菌群相似性均不高，分布在44%～56%，其中各组盲肠微生物与对照组的相似性指数均高于回肠,这说明饲粮中碳酸氢钠对回肠微生物的作用大于对盲肠微生物的作用。各组间盲肠的对比中，以5%碳酸氢钠添加组与对照组的相似性指数最低，为54.17%；各组间回肠的对比中，2.5%，5%碳酸氢钠添加组与对照组的相似性指数较低，分别为46.11%和44.94%。 3 讨 论

3.1 饲粮中添加碳酸氢钠对蛋鸡肠道内容物及粪便pH的影响

动物肠道内容物的pH由很多相关因素共同决定[15-18]，其对动物的消化酶活性及肠道微生物的定殖都有重要作用[5，19]。当饲粮中加入碳酸氢钠时，由于碳酸氢钠呈弱碱性，有很强的缓冲能力，故其可在胃中中和胃酸，使胃中的pH上升。少量的碳酸氢钠在中和一定量的胃酸后，会刺激机体内的负反馈机制，促进胃酸分

泌，使胃内pH基本保持不变。但大量的碳酸氢钠进入消化道后会中和大量胃酸，超过了负反馈机制的调节能力，故可使胃内pH升高，并且影响肠道pH。 在本试验中，0.1%和0.5%碳酸氢钠添加水平组的肌胃pH与对照组无显著差异，而2.5%和5%碳酸氢钠添加水平组的肌胃pH显著高于对照组。胃中流向十二指肠的盐酸会刺激促胰液素和胆囊收缩素，促使胰液和胆汁的分泌及排出，用以中和胃酸。相反，当大量盐酸被中和时，胰液和胆汁的分泌量也会减小[17-18]。在本试验中，2.5%和5%水平组的十二指肠pH虽仍显著高于对照组，但与对照组之间的差距已大幅度减小。碳酸氢钠进入肠道内是以离子形式被吸收的，故吸收较其他大分子快，吸收部位在肠道前段。本试验结果显示，5%碳酸氢钠添加水平组空肠pH显著高于对照组，其余4组与对照组无显著差异，而回肠和盲肠的pH各组间均无显著差异，说明饲粮中过量的碳酸氢钠对肠道后段pH的影响较小。碳酸氢钠在小肠中被吸收后，迅速转移至血液中，参与体内的酸碱调节。当体内碱过剩时，机体可通过减小在肾脏的重吸收来调节体内的酸碱平衡。因此，当过量的碳酸氢钠进入体内后，会在肾脏聚集，通过尿液排出。对于家禽而言，粪尿是通过泄殖腔一起排出体外的，这可以解释本试验中“回肠和盲肠内容物的pH差异不显著，而粪便的pH却随着碳酸氢钠添加量加大而显著升高”的结果。 3.2 饲粮中添加碳酸氢钠对蛋鸡肠道蛋白酶活性的影响

有报道显示，蛋鸡在热应激情况下对蛋白的利用率明显降低[20]，而碳酸氢钠通常作为一种抗热应激添加剂，其对蛋鸡蛋白质利用率的影响可能是其缓解热应激的机理之一。而蛋鸡肠道中的蛋白酶活性极大程度上决定了其对蛋白质的利用率，因此，研究饲粮中的碳酸氢钠对蛋白酶活性的影响有重大意义。饲粮中少量的碳酸氢钠可使胃液的分泌量增加，而胃液分泌量的增加可能是本试验中0.1%碳酸氢钠添加水平组胃蛋白酶活性有上升趋势的原因。而当大量的碳酸氢钠进入胃中，食糜的pH改变量超出了机体的调节能力，直接降低了食糜中胃蛋白酶的活力。胃蛋白酶的适

宜pH为1～4[21]，从本试验肌胃中pH的测定结果来看，2.5%和5%碳酸氢钠水平组的肌胃食糜pH已超出该范围，这可能是这2组胃蛋白酶活性显著低于对照组的主要原因。胰蛋白酶和糜蛋白酶的适宜pH为6～9[21]，从本试验十二指肠pH的测定结果来看，各组均未超过该范围。但是肠道中过量的碳酸氢钠会影响胰液的分泌，可能导致胰脏分泌这2种酶的量下降，以致十二指肠食糜中这2种酶的浓度下降，故其活力下降。另外，胰蛋白酶和糜蛋白酶都是以酶原的形式分泌出来的，胰蛋白酶是自身和糜蛋白酶的活化剂[21]，当胰蛋白酶的量减少时，这2种酶的活化程度降低，这可能是2.5%和5%碳酸氢钠添加水平组胰蛋白酶和糜蛋白酶活性显著低于对照组的另一个原因。

3.3 饲粮中添加碳酸氢钠对蛋鸡肠道微生物区系的影响

动物胃肠道内定殖的微生物及其发酵产物对动物的消化吸收、黏膜代谢及生理、局部和全身的免疫应答有着不可忽视的作用[22]。而消化道后段作为肠道微生物的主要活动场所，其中的微生物菌群在整个肠道微生物菌群中发挥着主要作用。一般认为，酸性的肠道环境有利于共生微生物在动物体内定殖并抑制有害微生物在肠道内生长[19]，而消化道前段的酸碱性影响着消化道微生物从外界环境向动物体内的迁移[23]。这可能是本试验中碳酸氢钠对回肠菌群的作用效果比对盲肠菌群更明显的原因。此外，李永洙[22]指出，饲粮中的氨基酸含量对盲肠中的微生物菌群有显著影响。本试验中，由于饲粮中过量的碳酸氢钠影响了小肠内蛋白酶的活性，故可能对肠道内容物中氨基酸的含量有所影响，这可能是本试验中碳酸氢钠高剂量组(2.5%和5%)的盲肠微生物与其他组产生差异的又一原因。另有研究指出，宿主的个体原因对肠道微生物的组成影响很大，即使是饲养于相同环境、饲喂相同饲料且相互接触的同龄肉鸡之间都会表现出不同的图谱[23-24]。这可能是本试验各组间的相似性指数比较低的原因。另外，对DGGE结果中的特异性条带进行切胶回收并测序，可能会得到更有意义的结果，这有待后续研究。

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